维修排除illumina DNA 测序仪问题：
      自动 DNA 测序是分子生物学实验室中最常见且通常最强大的技术之一。不幸的是，它并不总是有效，当它无效时，很难找出哪里出了问题。幸运的是，大多数失败（或次优）的 DNA 测序结果只有有限的几个原因。为了帮助排除illumina DNA 测序问题，我们创建了一系列指南来确定最常见的原因。这些指南还包括有关如何克服每种问题类型的提示，以及提高 DNA 测序质量的更一般提示。如果您对这些指南有任何意见或问题，请电话联系我们的支持团队，我们很乐意听取您的建议。

 

      我的illumina DNA测序仪测序数据中的信号强度很低。什么可能导致这种情况？
      低信号强度可能由许多因素引起，包括热循环仪故障（在整个板故障的情况下）、清理不良和测序模板数量/质量不足。使用测序试剂盒中提供的 pGEM 对照和 -21 M13 引物来隔离模板质量/质量问题或测序反应失败。如果 DNA 质量、PCR 纯化和测序反应纯化步骤正确执行，在测序反应中增加模板和引物可以改善信号。有关测序反应中使用的模板 DNA 量，请查看此信息。 检查模板的质量。如果需要，准备新鲜的 DNA 并重复反应。您可以访问我们的质粒 DNA 纯化支持中心页面以获取有关纯化的提示。
      一般来说，我们建议您：
      1、确保在illumina测序工作流程中使用新鲜、未过期的试剂。
      2、检查热循环仪，将升温速率设置为 1 摄氏度/秒，使用正确的热循环参数并检查热循环仪校准。 
      3、准备新的底漆工作库存或订购新底漆。在最终反应中使用 3.2 pmol。
      4、如果在illumina测序反应中使用的 BigDye™ Terminator Ready Reaction Mix 少于推荐量，请在 20 µL 最终反应体积中使用 8 µL 的推荐量，或在 10 µL 最终反应体积中使用 4 µL。 
      5、如果存在染料斑点，请查看毛细管电泳 DNA 测序指南或与净化套件制造商联系，以获取更多故障排除建议以去除染料斑点。

 

      如何确定illumina DNA 测序失败的原因
      确定illumina DNA 测序结果不佳的原因通常非常困难，因为特定的测序问题可能有许多不同的原因，或者是多种相互作用因素的结果。通常，找出特定问题真正原因的唯一方法是执行消除过程。通过目视检查测序轨迹的原始数据色谱图和处理后的数据色谱图，可以大大简化此过程。在以下指南中，我们提供了有关最常见的测序问题的详细信息，以及对其最可能原因的建议。原因按从最常见到最不常见的顺序列出。我们还提供了有关如何克服每种测序问题类型的解决方案（如果已知）。手动检查的替代方法（如果您运行的跟踪次数过多，这将变得非常劳动密集型）是使用自动跟踪分析系统，例如我们的QualTrace III DNA 测序 QC 软件。QualTrace III将针对许多不同的测序问题自动扫描迹线，并且由于它通过分析原始数据来工作，因此它可以与任何碱基识别器一起使用。